补体有结合抗原-抗体复合物的特性。病毒抗原与特异性抗体（试验材料）形成复合物时，加入一定量补体。则补体与之结合，不再以游离的形式存在，此时，加入另一对抗原，抗体（羊血球溶血索），由于后者没有游离的补体参与反应，结果不溶血，表示补体已结合于抗原-抗体复合物中，称为阳性，如试验材料中没有病毒抗原一抗体复合物，则加入的定盘补体仍以游离的形式存在，与再加入的羊血球溶血索反应而显溶血，此为阴性。

A3.2材料及方法

（略）

A3.3意义

单份血清抗体滴度达1：32，对诊断登革热有参考意义，恢复期血清比急性期血清抗体滴度有4倍抗体增长可确诊。

A4用免疫荧光法（FA/IFA）检测双份血清IgG抗体

A4.1原理

某些荧光索（常用异硫氰酸荧光素）能与抗体蛋白分子结合，而不丧失抗体活力，仍能和相应的抗原发生特异免疫反应，产生免疫复合物，这种复合物由于有荧光色素的参与，在荧光显微镜下显示荧光，表明有特异性抗原存在。直接免疫荧光法可用于检测感染细胞内的特异性抗原，间接免疫荧光法可查待检血清中的特异性抗体。

A4.2材料

A4.2.1 10～100 μL，100～1 000 μL可调移液器各1支。

A4.2.2 DV1～4型抗原片（登革标准毒株感染Cs/36细胞制备，低温干燥保存）及相应单克隆抗体（阳性对照）、阴性血清。

A4.2.3羊抗人（兔抗人）IgG荧光抗体。

A4.2.4待检患者血清（急性期和恢复期）。

A4.2.5常用稀释液。pH7.2～7.4PBS、伊文斯兰、封片胶等。

A4.2.6荧光显微镜。

A4.3检测步骤

A4.3.1取出抗原片，冷风吹干。

A4.3.2用pH7.2～7.4PBS稀释待检血清，从1：20开始，倍比稀释至所需稀释度。

A4.3.3用加样器依次从商稀释度向低稀释度逐个加入稀释的待检血清于四个型的DV抗原片孔中，每型各加2孔待检系列稀释血清，血清最以完全覆盖抗原面而不溢出孔外为准，置湿盒内，在37℃水浴孵育30 min（每次试验同时作阴、阳性对照）。

A4.3.4用pH7.2～7. 4PBS洗涤3次，每次约30 s至1 min，再用蒸馏水洗1次，冷风吹干。

A4.3.5用pHT.2～7.4PBS稀释荧光抗体。使其内含2个工作单位和1 ：8 000伊文斯兰的荧光抗体，加入各孔中。使完全覆盖抗原面-置湿盒中，37℃水浴作用30 min.取出，如A4.3.4洗涤及吹干。

A4.3.6用封片胶（或甘油缓冲液）封片，荧光显微镜观察结果。

A4.4结果判断

特异性荧光呈黄绿色颗粒，分布在感染细胞浆中。根据荧光亮度和阳性细胞在细胞总数中所占的比例可将荧光反应大致区分为“+～++++”，无荧光者为“-”，检测抗体滴度时，以特异荧光达“++”最高血清稀释度的倒数表示。

A4.5意义

阳性结果，表明提供血清的个体曾受到DV感染，大于1：80有诊断参考意义医|学教。恢复期抗体滴度比急性期抗体滴度有4倍或以上升高则可确诊。

A5免疫斑点（dengue blot）试验检测DV-IgG抗体

A5.1原理

根据抗原抗体特异性结合的原理，把抗原固定于硝酸纤维索膜载体，与待测血清的特异性抗体结合成抗原抗体复合物，再与酶标记物结合，通过酶与底物作用产生颜色，表示阳性，阴性不显色。

A5.2材料及方法

（略）。

A5.5意义

阳性结果可作为DV感染参考。早期血清“-”，恢复期血清“+”确诊DV感染。

A6 中和试验（NT）

A6.1原理

使用对病毒敏感的动物、细胞或鸡胚为材料，测定病毒受免疫血清中和残存感染力与对照试验组比较，计算出中和指数。

A6.2材料和方法

（略）

A6.3意义

中和指数在9以下为阴性，10～49为可疑，50以上为阳性。用于鉴定病毒和疾病诊断。