怎么制备培养基

医学检验技师考试中需要掌握的知识点繁多，为帮助广大考生了解，医考必过网整理如下：

培养基的制备程序不同类型培养基制备的程序也不尽相同。但一般培养基的程序主要可分为：配料、溶化、矫正pH、澄清过滤、分装、灭菌及检定等8个步骤。

（一）配料

按培养基处方准确称取各种成分，先在三角烧瓶中加入少量蒸馏水，再加入各种成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水冲洗瓶壁。

（二）溶化

将各种成分混匀于水中，最好以流通蒸气溶化半小时，如在电炉上溶化应随时搅拌，如有琼脂成分时更应注意防止外溢。溶化完毕，补足失去的水分。

（三）矫正pH

1.pH测定

取与标准管同口径的试管（通常用华氏试管）3支，于第1、3管各加入欲测定pH的的培养基5ml，并于第一管中加入0.2g/L的酚红0.25ml作为测定管，混匀；于第2管加入蒸馏水5ml，第4管为pH标准比色管。

2.pH的校正

若测定管过酸或过碱可用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸溶液矫正，直至颜色与标准管相同为止，加碱或加酸时要精确缓慢，每加1滴后要充分混匀，比色后再加第2滴（有时仅加半滴）准确记录加入的量。

3.计算

设5ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol/L氢氧化钠0.15ml，现有培养基4990ml，需加氢氧化钠的量可按下列方法计算：5∶4990=0.15∶X

X=0.15×4990/5=149.7（ml）

如将此0.1mol/L的氢氧化钠改用1mol/L的氢氧化钠时，则需14.9ml即可。

（四）过滤澄清

培养基配制后一般都有沉渣或混浊出现，需过滤成清晰透明后方可使用，常用的过滤方法如下：

1.液体培养基

液体培养基必须清晰，以便观察细菌的生长情况，常用滤纸过滤，亦可在加热前加入用水稀释的鸡蛋白（1000ml培养基用1个鸡蛋白）在100℃加热后保持60～70℃40～

60分钟，使其不溶性物质附于凝固的蛋白上而沉淀，然后再用虹吸法吸出上清液或以滤纸过滤。

2.固体培养基

如系琼脂培养基，于加热融化后需趁热以绒布或两层纱布中夹脱脂棉过滤；亦可用

自然沉淀法，即将琼脂培养基盛人铝锅或广口搪瓷容器内，以高压（103.43kPa）蒸汽融化15分钟后，静置高压锅内过夜，次日将琼脂倾出，用刀将底部沉渣切去，再融化即可收清晰的琼脂培养基。

（五）分装

1.根据需要将培养基分装于不同容量的三角烧瓶、试管中。分装的量不宜超过容器的2/3以免灭菌时外溢。

2.琼脂斜面分装量为试管容量的1/5，灭菌后须趁热放置成斜面，斜面长约为试管长的2/3.

3.半固体培养基分装量约为试管长的1/3，灭菌后直立凝固待用。

4.高层琼脂分装量约为试管的1/3，灭菌后趁热直立，待冷后凝固待用。