芩连胶囊中黄芩甙的含量测定：

摘要：用高效液相色谱法测定芩连胶囊中黄芩甙的含量。经方法研究，空白无干扰，平均回收率为100.22%，RSD为1.82%.方法准确、快速、简便、灵敏，为该制剂的质量控制提供了实验依据。

芩连胶囊系《中国药典》（1995年版）收载的芩连片的剂型改进品种，经提取、喷雾干燥等制备成的胶囊剂。主要用于脏腑蕴热、头痛目赤、口鼻生疮、热痢疼痛、湿热带下及疮疖肿痛，具有清热解毒、消肿止痛的功效［1］。芩连胶囊方中黄芩为主药之一，而黄芩甙为主要成分，故选择黄芩甙为质控指标。

1 材料与仪器

1.1 仪器 日本岛津LC-6A型高效液相色谱仪，C-R3A数据处理仪，SPD-6AV紫外可见光检测器，CQ-250超声波清洗器（上海必能信号超声有限公司）。

1.2 药品 芩连胶囊、缺黄芩阴性胶囊由成都迪康制药有限公司提供；黄芩甙对照品，由中国药品生物制品检定所提供；乙腈、甲醇、磷酸等均为分析纯；水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：天津凯德科学仪器有限公司C18柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）；流速：0.8mL/min；检测波长：278nm.

2.2 溶液的配置

2.2.1 供试品溶液的制备 精密称取芩连胶囊内容物1g，置索氏提取器中，用甲醇提取3h，浓缩，置50mL量瓶中，加甲醇转移、洗涤和稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芩甙对照品9.0mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶液并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每1mL中含黄芩甙90μg）。

2.2.3 缺黄芩的阴性对照品溶液的制备 称取缺黄芩的阴性样品1g，照供试品溶液的制备项下同法操作，即得。

2.3 色谱条件的选择 经试验后采用《中国药典》中黄芩项下黄芩甙的色谱测定条件，供试品溶液中黄芩甙分离状态最佳，未见缺黄芩的阴性对照品溶液出现相同色谱峰，表明制剂中其他成分对黄芩甙的分离无干扰。此时黄芩甙色谱峰的保留时间为14.22min，理论板数4330.

用紫外扫描测定黄芩甙对照品的最大吸收波长278nm，考虑到与《中国药典》中黄芩项下检测波长相同，并便于本品黄芩原料药的质量控制，故确定黄芩甙检测波长为280nm.

2.4 标准曲线的制备 线性关系考查：精密吸取对照品溶液2.5、5.0、10、15、20μL，每个体积重复进样三次，按上述色谱条件测定峰面积，以进样量（Y）和峰面积进行回归计算，得出黄芩甙标准曲线的回归方程：Y=124389X-448（r=0.9999），线性范围为0.225～1.800μg.

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液4μL，重复进样5次，结果峰面积积分值分别为56195，55338，56119，55754，56291，平均为55939，RSD为0.70%.

2.6 重现性试验 精密吸取本品同一批号（960916）的5份样品各1g，按供试品溶液制备方法，并在相同色谱条件下测定黄芩甙含量，结果5份样品黄芩甙含量分别为0.229%，0.226%，0.225%，【BF〗0.228%，0.232%，平均为0.228%，RSD为1.20%.

2.7 加样回收试验 精密称取同一批号样品五份各0.5g，加入对照品溶液10mL（浓度为每1mL中含黄芩甙90μg），置索氏提取器中用甲醇提取3h，浓缩，置50mL量瓶中，加甲醇转移、洗涤，并稀释至刻度，摇匀。精密吸取该溶液10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，计算，结果见表1.

表1 加样回收试验

编号 样品量/g 样品中黄芩甙量/mg 添加黄芩甙量/mg 测出黄芩甙量/mg 回收率/% 平均值/% RSD/%

1 0.5122 1.22 0.90 2.14 102.22

2 0.5074 1.18 0.90 2.09 101.11

3 0.5015 1.10 0.90 2.01 101.11 100.22 1.82

4 0.5160 1.28 0.90 2.16 97.78

5 0.5133 1.24 0.90 2.13 98.89

结果表明，本法具有良好的回收率。

2.8 样品测定 分别精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按上述方法测定，对5批芩连胶囊分别进行了三次测定，结果见表2.

表2 样品含量测定

批号 黄芩甙含量/% 平均值/% RSD/%

1 2 3

950621 0.251 0.253 0.254 0.253 0.604

950924 0.254 0.258 0.259 0.257 1.030

960916 0.227 0.224 0.231 0.227 1.547

960913 0.218 0.222 0.225 0.222 1.582

960908 0.262 0.265 0.268 0.265 1.132

3 讨论

提取方法考察表明，回流法提取较超声法为好，而且甲醇回流3h较70%乙醇回流提取和甲醇回流1h提取更为完全。实验中发现甲醇回流3h后回流液已无色，故拟定供试品溶液制备方法为用甲醇回流3h.实验中比较了甲醇磷酸水、乙腈磷酸水等多种流动相体系，发现乙腈磷酸水系统出现的色谱峰较多，包括小檗碱、巴马丁等指标成分也得到较好分离；甲醇磷酸水系统则相对简单。经反复试验最后选择《中国药典》（1995年版）中黄芩项下黄芩甙测定条件，结果方法稳定、准确、简便，可靠性好。